Détection moléculaire par PCR en temps réel et Spéciation par PCR conventionnelle

Détection moléculaire par PCR en temps réel et spéciation des espèces rickettsies.

Sang total – minimum 1.0 mL. Tissu – Biopsie de l’escarre.

Entreposer les échantillons de sang au réfrigérateur jusqu’à leur envoi pour analyse. Les échantillons de tissu doivent être congelés jusqu’à leur envoi pour analyse. Expédier le sang total à 4^oC; expédier les tissus congelés.

Sang total: tube EDTA. Tissu ou écouvillonnage: soumettre dans un tube à prélèvement stérile.

Entreposer les échantillons de sang au réfrigérateur jusqu’à leur envoi pour analyse. Les échantillons de tissu doivent être congelés jusqu’à leur envoi pour analyse. Expédier le sang total à 4^oC; expédier les tissus congelés.

L'expédition des prélèvements doit être confiée à une personne détenant un certificat de formation TMD, conformément au Règlement sur le TMD. Pour plus d'information sur la catégorisation des matières à des fins d'expédition, veuillez consulter la partie 2 de l'appendice 3 du règlement ou la section 3.6.2 du règlement de l'IATA sur les produits dangereux.

Infection à rickettsies présumée.

Requête d’analyse pour les rickettsies et maladies zoonotiques apparentées complétée incluant le nom, l’adresse et le numéro de téléphone de l’expéditeur. Nom du patient ou identifiant (# du laboratoire qui le réfère), date de naissance, test(s) demandé(s) et histoire clinique. Type de spécimen et date du prélèvement. Si possible, inclure les antibiotiques administrés et les antécédents de voyage.

On procédera à la spéciation des échantillons positifs par PCR conventionnelle et séquençage.

La PCR en temps réel est réalisée à l’aide d’essais spécifiques pour le gène de l’antigène de 17 kDa et le gène de la citrate synthase du genre Rickettsia. Si un échantillon s’avérait positif par PCR en temps réel, une épreuve PCR conventionnelle et un séquençage du gène de la protéine de membrane externe seront effectués pour identifier l’espèce exacte du groupe des fièvres pourprées. Pour la détection spécifique de R. typhi, un épreuve spécifique pour le gène B de la protéine de membrane externe est effectuée. Pour la détection spécifique de R. prowazekii, une épreuve spécifique pour le gène citrate synthase de cette espèce est effectuée.

15 jours civils.

1. Jiang J, TC Chan, JJ Temenak, GA Dasch, WM Ching, AL Richards. Development of a quantitative real-time polymerase chain reaction assay specific for Orientia tsutsugamushi. Am J Trop Med Hyg 2004; 70(4): 351-356.
2. Stenos, J, SR Graves, NB Unsworth. A highly sensitive and specific real-time PCR assay for the detection of spotted fever and typhus group rickettsia. Am J Trop Med Hyg 2005; 73(6):1083-1085.
3. Henry KM, J Jiang, PJ Rozmajzl, AF Azad, KR Macaluso, AL Richards. Development of quantitative real-time PCR assays to detect Rickettsia typhi and Rickettsia felis, the causative agents of murine typhus and flea-borne spotted fever. Mol Cell Probes 2007; 21(1):17-23.
4. Wikswo ME, R Hu, GA Dasch, L Krueger, A Arugay, K Jones, B Hess, S Bennett, V Kramer, ME Eremeeva. Detection and identification of spotted fever group rickettsiae in Dermacentor species from Southern California. J Med Entomol; 45(3): 509- 516.
5. Svraka S, JM Rolain, Y Bechah, J Gatabazi, D Raoult. Rickettsia prowazekii and real-time polymerase chain reaction. Emerg Infect Dis 2006; 12(3): 428-432.