Détection moléculaire (RT-PCR)

Détection moléculaire du virus de la rougeole par RT-PCR.

 

Urine, écouvillonnage nasopharyngé, écouvillonnage de gorge. Tous les échantillons doivent être prélevés le plus tôt possible après le début de l’éruption cutanée (dans les 7 jours pour l’urine et dans les 4 jours pour les écouvillons nasopharyngés ou de gorge). Remarque : Les échantillons prélevés plus tard seront acceptés, mais la sensibilité du test ne sera pas optimale. Des isolats viraux peuvent aussi être expédiés.

 

Traitement de l’urine par centrifuge à 2500 tours/min pendant 15 minutes à 4 °C. Remettre en suspension le sédiment dans 1-2 mL de milieu de transport viral. Pour les écouvillons nasopharyngés ou de gorge, enlever l’écouvillon. Les conserver à 4 °C et les expédier sur de la glace humide de façon qu’ils arrivent au LNM dans les 48 heures suivant le prélèvement. Sinon, les congeler à -70 °C et les expédier congelés sur de la glace sèche. Les isolats viraux doivent être expédiés congelés (-70 °C) sur de la glace sèche.

 

Prélever 50 mL (minimum 10 mL) d’urine dans un contenant stérile. Pour les écouvillonnages, utiliser des écouvillons stériles approuvés pour l’isolement des virus pour le prélèvement des cellules épithéliales de la gorge ou des voies nasales. Placer les écouvillons de gorge et nasopharyngés dans 2-3 mL de milieu de transport viral (MTV) pendant au moins 1 heure. Pour l’isolat viral, prélever les cellules infectées et le milieu, et soumettre au moins 1,0 mL.

Traitement de l’urine par centrifuge à 2500 tours/min pendant 15 minutes à 4 °C. Remettre en suspension le sédiment dans 1-2 mL de milieu de transport viral. Pour les écouvillons nasopharyngés ou de gorge, enlever l’écouvillon. Les conserver à 4 °C et les expédier sur de la glace humide de façon qu’ils arrivent au LNM dans les 48 heures suivant le prélèvement. Sinon, les congeler à -70 °C et les expédier congelés sur de la glace sèche. Les isolats viraux doivent être expédiés congelés (-70 °C) sur de la glace sèche.

 

L'expédition des prélèvements doit être confiée à une personne détenant un certificat de formation TMD, conformément au Règlement sur le TMD. Pour plus d'information sur la catégorisation des matières à des fins d'expédition, veuillez consulter la partie 2 de l'appendice 3 du règlement ou la section 3.6.2 du règlement de l'IATA sur les produits dangereux.

Consulter la référence 1 pour voir les définitions nosologiques.

 

Requête d’analyse pour la rougeole, les oreillons et la rubéole complétée. Indiquer la date de l’apparition de l’éruption cutanée, la date du début de la fièvre, la date de la dernière vaccination contre la rougeole (si récent), les antécédents de voyage, et l’identifiant MARS (dans l’application de surveillance de la rougeole et de la rubéole [MARS] du RCRSP) ou numéro de cas si connu.

 

Le génotypage du virus de la rougeole est effectué automatiquement sur les échantillons dans lesquels le virus a été détecté par RT-PCR. Il est important de fournir les antécédents complets du patient (y compris les voyages) pour une surveillance génotypique adéquate. Ce test est accrédité selon la norme CAN-P-4E (ISO/IEC 17025). Le LNM est un laboratoire de référence régional agréé de l’OMS/OPS pour la rougeole et la rubéole.

 

L’ARN extrait des échantillons est analysé par RT-PCR en temps réel pour les gènes de la Nucléoprotéine (N) et de l’Hémagglutinine (H) de la rougeole (4). Un résultat positif par RT-PCR est une confirmation en laboratoire d’une infection de rougeole.

 

7 jours civils. Des analyses STAT seront effectuées sur demande.

 

1. Measles and Rubella Elimination Working Group, Health Canada, Public Health Agency of Canada. Guidelines for the prevention and control of measles outbreaks in Canada. CCDR. 2013; 39:ACS-3. Available at http://www.phac-aspc.gc.ca/publicat/ccdr-rmtc/13vol39/acs-dcc-3/index-eng.php#appa.
2. Tipples G, J Hiebert. Detection of measles, mumps and rubella viruses. Methods Mol Biol. 2011; 665: 183-193.
3. World Health Organization. Manual for the laboratory diagnosis of measles and rubella virus infection. 2007. WHO/IVB/07.01
4. Hummel KB, Lowe L, Bellini WJ, Rota PA. Development of quantitative gene-specific real-time RT-PCR assays for the detection of measles virus in clinical specimens. J Virol Methods. 2006; 132:166-73.